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中壓玻璃層析柱的裝填和分離操作步驟

更新時間:2024-11-11瀏覽:687次

  中壓玻璃層析柱的裝填操作
  準備物料:預先備好所有所需物料,包括樣品、填料、溶劑等,檢查所有設備是否完好,確保能夠正常工作。
  清洗層析柱:在進行裝填操作前,需將玻璃中壓層析柱內部洗凈并干燥。注意檢查層析柱的所有接頭和部件,確保沒有破損或漏氣。
  保持溫度一致:確保填充料、層析柱、所有緩沖液以及樣品的溫度保持一致,避免溫度差異可能導致氣泡產生。
  濾膜過濾和超聲脫氣:所有要通過柱子的液體,包括水、平衡緩沖液、洗脫緩沖液和再生溶液,都應該經過0.45微米的濾膜過濾,然后進行超聲脫氣。但要注意,填料本身不應進行超聲脫氣。
  填料清洗:用純水多次清洗填料,洗掉保存液,并將上層的細小顆粒排除。
  柱內引水:關閉層析柱出水口,使用玻璃棒將約1/4柱體積的水(或緩沖液)倒入層析柱中,確保底端沒有氣泡。
  填料填充:用玻璃棒將填料攪拌成懸漿,然后均勻地一次性倒入柱內,務必避免產生氣泡。填料穩(wěn)定后,打開出液管,讓凝膠在柱內自由沉降。
  壓實填料:若是手動操作,可使用純水沖洗幾個柱體積,使填料床穩(wěn)定。若使用儀器操作,可以逐漸增加流速,以壓實填料。需要注意的是,填料的壓實程度不能過松也不能過緊,要確保不超過填料的耐壓限制。
  樣品處理:在進行上樣之前,必須對樣品進行離心或通過0.45微米的濾膜過濾,以確保樣品無雜質進入層析柱。
  中壓玻璃層析柱的分離操作
  加載樣品:將待分離的混合物溶液緩慢地注入到層析柱頂部,并讓其滲透到填料中。為保持分離效果,應避免過快地注入溶液,以免造成溶液通道的形成??梢酝ㄟ^使用滴液漏斗、加壓泵等工具來控制注液速度。
  洗脫過程:根據需要選擇不同的洗脫溶劑進行分離。洗脫溶劑的選擇應根據待分離物質的性質和親疏水性來確定,常用的洗脫溶劑有水、乙酸乙酯、甲醇等。在洗脫過程中,可以根據需要逐漸改變溶劑的組成和濃度,以實現對不同成分的分離和純化。
  收集組分:根據洗脫的結果,可以收集不同組分的溶液,并進一步進行分析或后續(xù)處理。收集時應注意避免交叉污染和混雜,可以使用不同的收集容器或提前標記好。
  五、裝卸柱操作
  遵循步驟:在裝卸柱操作時,應按照操作步驟進行,不得隨意更換或調整設備。如有需要更換設備或調整設備,則必須在實驗室管理人員的指導下進行。
  輕拿輕放:裝卸柱操作時,要輕拿輕放,避免碰撞損壞。同時,要戴好手套和護目鏡,以免對身體造成傷害。
  中壓玻璃層析柱的保養(yǎng)規(guī)程
  定期清洗:使用完層析柱后,應及時清洗干凈,避免殘留物對下次實驗產生影響。同時,也要定期對層析柱進行檢查和維護,確保其處于良好的工作狀態(tài)。
  潤滑保養(yǎng):對于層析柱的各個活動部件,應定期進行潤滑保養(yǎng),以保證其正常運轉。
  防腐處理:對于易生銹的部位,應進行防腐處理,以延長層析柱的使用壽命。
  記錄使用情況:每次使用層析柱后,都應記錄使用情況,包括使用時間、使用人員、使用效果等。這有助于了解層析柱的使用情況,及時發(fā)現問題并進行維修。
  注意事項
  安全操作:在使用玻璃中壓層析柱時,需要注意安全操作。例如,添加樣品時一定要注意溶液的濃度及體積,最好在安全柜下進行操作。同時,要避免噴濺操作,以免對身體造成傷害。
  避免劇烈震動和碰撞:在使用過程中,要避免劇烈震動和碰撞,以免柱子破裂。
  防止氣泡產生:在填充和洗脫過程中應注意避免氣泡的產生,可以使用氣泡去除器或震蕩裝置來輔助去除。
  選擇合適的柱子尺寸和填料材料:根據待分離物質的性質和分離需求,選擇合適的柱子尺寸和填料材料。一般較小的分子可選用較小尺寸的柱子,而大分子或大樣品量則需要較大的柱子。填料的使用量一般根據柱子的尺寸和待分離物質的性質來確定,通常填充至柱子的1/4到1/2處即可。
  控制流速:在分離過程中,需要控制流速以避免過快的流速影響分離效果??梢酝ㄟ^調節(jié)壓力或使用限流器來實現流速的控制。
 

 

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