蛋白層析柱的柱效測(cè)定是在純化實(shí)驗(yàn)中非常重要的步驟，也是我們得到準(zhǔn)確結(jié)果的保證。如果您是自己裝柱，建議您在使用前先做柱效測(cè)定來(lái)確定柱子的效果。另外，當(dāng)層析柱使用過(guò)一定次數(shù)，或者發(fā)生實(shí)驗(yàn)結(jié)果異常，柱子進(jìn)入氣泡，超壓等問題，我們也可以對(duì)柱子進(jìn)行柱效測(cè)定來(lái)判斷柱效是否正常。

 

　　即使用少量的樣品流經(jīng)裝填好的層析柱中，通過(guò)儀器上的檢測(cè)器檢測(cè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后對(duì)洗脫峰進(jìn)行分析。凝膠層析用來(lái)分離大小不同的蛋白，分子量小的通過(guò)凝膠顆粒中的孔隙路徑相對(duì)較長(zhǎng)，分子量大的通過(guò)顆粒間隙路徑相對(duì)短些。同樣的時(shí)間，路徑短的，流的快的就先出，從而達(dá)到分離的目的。

 

　　簡(jiǎn)單的比喻，兩人賽跑，一步之內(nèi)很難分勝負(fù)，但是五十米，或者一百米就可以分出先后，所以柱子長(zhǎng)短關(guān)乎分離效果。其它層析如離子交換層析(親和層析)是靠跟配基結(jié)合能力強(qiáng)弱(特異性結(jié)合)，來(lái)達(dá)到純化作用，裝柱的長(zhǎng)短關(guān)系著柱載量，所以柱的長(zhǎng)短由你的你的樣品量來(lái)決定。

 

　　為了得到純度高、特異性好的抗大豆球蛋白多克隆抗體，用溴化氫活化的瓊脂糖4B純化經(jīng)硫酸銨分級(jí)沉淀后的抗體，此免疫親和層析過(guò)程節(jié)省時(shí)間且操作簡(jiǎn)單。經(jīng)凝膠過(guò)濾層析的大豆球蛋白，溶脹后的填料與大豆球蛋白配基以共價(jià)鍵的形式連接，利用抗原抗體特異性結(jié)合的特點(diǎn)，雜蛋白隨流動(dòng)相流出，再利用洗脫液將抗大豆球蛋白的目標(biāo)抗體特異性地洗脫下來(lái)，用紫外檢測(cè)儀檢測(cè)非特異性洗脫峰和特異性洗脫峰。

 

　　通過(guò)鑒定，多抗血清中的其它蛋白組分被非特異性洗脫掉，經(jīng)濃度測(cè)定，特異性洗脫的蛋白質(zhì)量濃度為0.3mg/mL，間接ELISA顯示，純化后血清稀釋128倍后顯示為陽(yáng)性。間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA測(cè)定抗體特異性結(jié)果顯示抗體特異性得到提高。抗體被成功純化，為加工破壞大豆球蛋白致敏性亞分子結(jié)構(gòu)定位奠定基礎(chǔ)，從而促進(jìn)低致敏性食品的研發(fā)。